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Nature報道了一項新的技術——新型核糖體，通過控制細胞合成蛋白質的過程，讓人們更好地理解蛋白質的合成過程。

核糖體是一種細胞器，細胞利用核糖體轉錄mRNA的信息，從而將氨基酸翻譯成蛋白質。試想，如果核糖體被改造，將會發生什么？伊利諾斯大學生化學家AlexanderMankin與西北大學生化學家Michel Jewett 聯手制造出新型核糖體，并且這種核糖體最大的優勢在于可以根據需要改變其原有的工作方式。

每個核糖體都是大、小兩個亞基組成的不規則顆粒，不同的大小亞基有多種結合方式，其可變性也很高。兩位學者根據這種大小亞基結合的多變性，通過RNA將大小亞基連接。經過長時間的研究發現，這種通過RNA將大小亞基結合的結構可以在細胞內穩定存在數月，并且這種核糖體亞基能夠維持細菌緩慢生長，證明這種合成的核糖體亞基與天然的核糖體可并行發揮作用。

這一發現開啟了分子生物學的新紀元，在未來或許可以制造出新型的抗生素。

WesternBlot操作

1. 收集蛋白樣品(Protein sample preparation) 
      使用適當的裂解液裂解貼壁細胞、懸浮細胞或組織樣品。對于某些特定的亞細胞組份蛋白，例如細胞核蛋白、細胞漿蛋白、線粒體蛋白等，可以參考相關文獻提取這些亞細胞組份蛋白，也可以使用試劑盒進行抽提。

需要測定每個蛋白樣品的蛋白濃度。可以使用BCA蛋白濃度測定試劑盒。
2. 電泳(Electrophoresis) 
(1) SDS-PAGE凝膠配制 
      SDS-PAGE凝膠可以參考一些文獻資料進行配制，也可以使用 SDS-PAGE凝膠配制試劑盒。 
(2) 樣品處理 
      在收集的蛋白樣品中加入適量濃縮的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以減小上樣體積，在相同體積的上樣孔內可以上樣更多的蛋白樣品。92℃或沸水浴加熱3-5分鐘，以充分變性蛋白。 
(3) 上樣與電泳 
     冷卻到室溫后，把蛋白樣品直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔內即可。  
     電泳時通常推薦在上層膠時使用低電壓恒壓電泳，而在溴酚藍進入下層膠時使用高電壓恒壓電泳。對于Bio-Rad的標準電泳裝置或類似電泳裝置，低電壓可以設置在80-100V，高電壓可以設置在120V左右。SDS-PAGE可以采用普通的電泳儀就可以滿足要求，為了電泳方便起見，也可以采用整個SDS-PAGE過程恒壓的方式，通常把電壓設置在100V，然后設定定時時間為90－120分鐘。設置定時可以避免經常發生的電泳過頭。
     通常電泳時溴酚藍到達膠的底端處附近即可停止電泳，或者可以根據預染蛋白質分子量標準的電泳情況，預計目的蛋白已經被適當分離后即可停止電泳。
3. 轉膜(Transfer) 
     我們推薦在Western實驗中選用PVDF膜(FFP36/FFP39)。硝酸纖維素膜(NC膜)(FFN06/FFN09)也可以使用，但硝酸纖維素膜比較脆，在操作過程中特別是用鑷子夾取等過程中容易裂開。膜的使用請參考生產商的推薦使用步驟。 
     通常如果使用Bio-Rad的標準濕式轉膜裝置，可以設定轉膜電流為300-400mA，轉膜時間為30-60分鐘。具體的轉膜時間要根據目的蛋白的大小而定，目的蛋白的分子量越大，需要的轉膜時間越長，目的蛋白的分子量越小，需要的轉膜時間越短。
     在轉膜過程中，特別是高電流快速轉膜時，通常會有非常嚴重的發熱現象，把轉膜槽放置在冰浴中進行轉膜。 
     轉膜的效果可以觀察所使用的預染蛋白質分子量標準，通常分子量最大的1-2條帶較難全部轉到膜上。轉膜的效果也可以用麗春紅染色液(P0022)對膜進行染色，以觀察實際的轉膜效果。也可以用考馬斯亮藍快速染色液(P0017)對完成轉膜的SDS-PAGE膠進行染色，以觀察蛋白的殘留情況。 
4. 封閉(Blocking) 
     轉膜完畢后，立即把蛋白膜放置到預先準備好的Western洗滌液中，漂洗1-2分鐘，以洗去膜上的轉膜液。從轉膜完畢后所有的步驟，一定要注意膜的保濕，避免膜的干燥，否則極易產生較高的背景。 
     加入Western封閉液，在搖床上緩慢搖動,室溫封閉60分鐘。對于一些背景較高的抗體，可以4℃封閉過夜。
5. 一抗孵育(Primary antibody incubation) 
     參考一抗的說明書，按照適當比例用Western一抗稀釋液稀釋一抗。 
洗凈封閉液，立即加入稀釋好的一抗，室溫或4℃在側擺搖床上緩慢搖動孵育一小時。如果一抗孵育一小時效果不佳，可以4℃緩慢搖動孵育過夜。或更據抗體的說明選擇適當的孵育溫度和時間。
     回收一抗。加入Western洗滌液，在側擺搖床上緩慢搖動洗滌5-10分鐘。洗凈洗滌液后，再加入洗滌液洗滌5-10分鐘。共洗滌3次。如果結果背景較高可以適當延長洗滌時間并增加洗滌次數。 
 6. 二抗孵育(Secondary antibody inucubation) 
     參考二抗的說明書，按照適當比例用Western二抗稀釋液稀釋熒光標記的二抗。 二抗需根據一抗進行選擇，例如，一抗是小鼠來源的IgG，則二抗需選擇抗小鼠IgG的二抗，如辣根過氧化物酶標記山羊抗小鼠IgG(H+L)。洗凈洗滌液，立即加入稀釋好的二抗，室溫或4℃在側擺搖床上緩慢搖動孵育一小時。 
     回收二抗。加入Western洗滌液，在側擺搖床上緩慢搖動洗滌5-10分鐘。吸盡洗滌液后，再加入洗滌液洗滌5-10分鐘。共洗滌3次。如果結果背景較高可以適當延長洗滌時間并增加洗滌次數。

7、熒光顯微鏡下觀察熒光